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ELISA實驗失敗的解決方案

發布時間: 2023-05-25  點擊次數: 191次

1. 試劑盒因素

試劑應選擇靈敏度高、特異性好、穩定性好、批間差小、操作方便的試劑。

不同廠家的試劑一定不能混用,包括底物和洗滌液。由于校準標準有差異,還有抗體、檢測方法、試劑、交叉反應等因素都會導致對樣本的檢測結果不一致。如:有的廠家酶標板孔間CV值大于20%,標記酶的活性及顯色液的穩定性比較差,使用劣質的試劑必然導致結果的假陽性或假陰性。

要注意試劑的批號和出廠日期,雖然試劑的有效期多為1年,最好選擇剛出廠的試劑盒。

要注意試劑盒的保存條件,一定要按試劑盒規定的要求保存。

要注意實驗的操作要符合試劑盒說明書的規定,實驗前要詳細閱讀說明書


2.標本因素和操作因素

血清是常規的ELISA標本,血漿一般可視為與血清同等的標本,標本引起的假陽性和假陰性結果主要是干擾性物質所致,分為內源性物質和外源性物質兩種:

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內源性物質

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有人認為大約40%的人血清標本中含有非特異性干擾物質,可以不同程度影響檢測結果。常見的干擾物質有:類風濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫源性誘導的抗鼠Ig (s)抗體、交叉反應物質和其它物質等。

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外源性物質

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   外源性物質常常是由于用于ELISA測定的血標本的采集、貯存等不當所致。如標本溶血、標本被細菌污染、標本貯存過久、標本凝集不全和采血管中添加物等影響。

   所以,當ELISA測定結果與預期或文獻報導中不一致時,應該首先考慮試劑因素,這個是做好實驗獲得正確數據的前提保證,其次還有標本因素和操作因素等多方面進行分析,并應采取相應措施排除干擾作用,從而為實驗提供正確可靠的檢測結果。


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